乐鱼体育- 乐鱼体育官方网站- 世界杯指定平台LEYU SPORTS慢病毒介导的转基因小鼠整合位点研究pdf

　　乐鱼体育,LEYU乐鱼体育官方网站,乐鱼体育靠谱吗,乐鱼体育app,乐鱼体育官网,leyu乐鱼体育,乐鱼体育入口,乐鱼体育官方,乐鱼leyu官网登录APP,乐鱼后台,乐鱼体育网址,乐鱼体育官方网站,乐鱼体育注册慢病毒载体整合到宿主细胞的染色体上可以长期稳定表达，目前已成为基因治疗和转基因动物载体研究的热点。慢病毒载体整合的位置效应是影响外源基因表达的重要因素，慢病毒载体整合位点的研究是探索外源基因整合机制的手段之一。本研究系统地培育了FUGW（FLAPUBPROMOTERGFPWRE）慢病毒转基因小鼠家系，并通过PCR方法筛选携带外源基因的慢病毒转基因小鼠。本研究利用定量PCR技术检测外源基因在FUGW转基因小鼠后代中的拷贝数。同时应用荧光活化细胞拣选（FLUORESCENCEACTIVATEDCELLSORTING，FACS）检测外源基因EGFP在FUGW转基因小鼠后代中的表达。通过分析FUGW转基因后代小鼠外源基因的表达和拷贝数，筛选出不同表达水平的单整合位点的转基因小鼠。对于筛选得到的单整合位点的FUGW转基因小鼠，应用反向PCR（INVERSEPCR）和接头PCR（ADOPTERPCR）技术定位FUGW转基因小鼠整合位点的基因组位置。同时应用荧光原位杂交（FLUORESCENCEINSITUHYBRIDIZATION，FISH）技术定位整合位点的染色置作为验证。结合FUGW转基因后代小鼠外源基因的表达情况，分析慢病毒载体整合位点与外源基因表达之间的联系。另外，本研究从转基因插入对宿主基因表达的影响入手，分析了外源基因在不同脏器中表达水平与整合的位点和脏器的关系，最终发现外源基因的表达水平主要受到该整合位点的状况的影响，同时外源基因的插入在部分脏器中也会极大的影响入宿主基因的表达状况。本研究为下一步开展转基因动物整合位点机理和应用研究奠定了基础。